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    黄曲霉毒素(B1,B2,G1,G2)的高效液相色谱HPLC检测方案
    [ 2016-06-04 ]

     

    【黄曲霉毒素】
    黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 (aspergillus flavus)寄生曲霉 (a.parasiticus)产生的次生代谢产物,在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。B1 、B2和G1、G2,就是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表,毒性最强的排行“B1”,B表示蓝色,因为它在紫外光的照射下会发出蓝色荧光。除了亲兄弟B2之外,它还有堂兄弟G1和G2,因为在紫外光下发射黄绿色荧光而得名。
    黄曲霉毒素在农产品中几乎无法避免,不想饿死的人类也只好无奈地吃下一些。世界各国,都只能设定一个“限量标准”。不超过那个标准,危害就小到可以忽略了。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中,特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品,当人摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入,可造成慢性中毒,生长障碍,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位,是目前已知最强致癌物之一。
    由于黄曲霉毒素在水溶液中会发生荧光淬灭,反相色谱中B1和G1两种异构体荧光强度很弱,需要进行衍生化。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类,我国药典在测定黄曲霉毒素时采用碘柱后衍生法。

    【样品处理过程】
    中药:取供试品粉末15g(过二号筛),精密称定,加入氯化钠3g,置于均质瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速搅拌2min(搅拌速度大于11000r/min),离心5min(离心速度大于2500r/min),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45um)滤过,量取续滤液20ml,待净化;
    大米:取样品25g,加入5g氯化钠与125ml提取液(70%甲醇-水溶液)混匀,剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;取10ml滤液加入20ml蒸馏水稀释,过滤,收集滤液作为上样液,取15ml该溶液待净化;
    植物油:取样品25g,加入125ml提取液(80%乙腈-水溶液)混匀,剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;取10ml滤液加入40ml蒸馏水稀释,过滤,收集滤液作为上样液,取25ml该溶液待净化;
    净化过程需用到黄曲霉免疫亲和柱,净化过程略。

    【色谱条件】
    色谱柱:C18, 4.6 mm*250 mm,粒度5 µm
    流动相:甲醇-乙腈-水=40:18:42
    流动相B:将2.2g一水庚烷磺酸钠与6.8g磷酸二氢钾溶于500ml水中,与500ml甲醇混合,PH=3.5;两相混合梯度脱洗;
    波长:λex=360nm     λem=450nm
    流速:0.8 mL/min
    衍生溶液为0.05%的碘溶液,衍生泵:0.3ml/min, 衍生温度:70℃

     

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